СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ Способом
Учебные материалы


СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ



Карта сайта romanshvedkoy.ru

Для установления максимума светопоглощения раствора рибофлавина снимают спектр поглощения 0,001% раствора СО в воде очищенной. Приготовление раствора описано ниже при построении градуировочного графика. Установлено, что максимум находится при длине волны 445 нм, при этом оптическая плотность Аст=0,486.

Построение градуировочного графика

Точную навеску рибофлавина (около 0,05г) помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане, доводят водой до метки и перемешивают (раствор А).

В мерные колбы вместимостью 100 мл последовательно вносят 1,0 мл; 3,0 мл; 5,0 мл; 7,0 мл; 9,0 мл раствора А и доводят водой до метки (получают 0,0002%; 0 0006%; 0,0010%; 0,0014% и 0,0018% растворы).

Измеряют оптическую плотность каждого раствора на спектрофотометре при длине волны 445 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствор сравнения – вода очищенная.

Строят градуировочный график зависимости концентрации от оптической плотности , рассчитывают уравнение градуировочного графика и коэффициент корреляции.

Данные заносят в таблицу.

Таблица 54. Результаты измерения оптической плотности.

V 0,02% р-ра (мл)
Конц. р-ра в % 0,0002 0,0006 0,0010 0,0014 0,0018
Оптическая плотность А

ПРАВИЛЬНОСТЬ

Приготовить три модельных раствора рибофлавина с борной кислотой.

Таблица 55. Приготовление модельных смесей рибофлавина с калия йодидом.

Модельная смесь
Навеска рибофлавина (г) 0,03 0,05 0,07
Навеска калия йодида (г) 4,5 7,5 10,5
Воды очищенной до 250 мл до 250 мл до 250 мл

Раствор А1.(модельная смесь 1) Точные навески рибофлавина (около 0,03 г) и калия иодида(около 4,5 г) помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.

Раствор А2. (модельная смесь 2) Точные навески рибофлавина (около 0,05 г) и калия иодида(около 7,5 г) помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.

Раствор А3. .(модельная смесь 3) Точные навески рибофлавина (около 0,07 г) и калия иодида(около 10,5 г) помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.

Растворы Б1, Б2, Б3. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 5,0 мл А1 и доводят водой до метки.

Растворы Б4, Б5, Б6. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 5,0 мл А2 и доводят водой до метки.

Растворы Б7, Б8, Б9. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 5,0 мл А3 и доводят водой до метки.

Измеряют оптическую плотность каждого из 9 приготовленных растворов на спектрофотометре при длине волны 445 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Параллельно измеряют оптическую плотность СО 0,002% раствора рибофлавина.

Приготовление раствора СО рибофлавина.



Точную навеску рибофлавина (около 0,05г) помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане, доводят водой до метки и перемешивают (раствор А).

В мерную колбу вместимостью 50 мл вносят 5,0 мл раствора А и доводят водой до метки (раствор Б).

1 мл раствора Б содержит 0,00002 г СО рибофлавина.

Расчет содержания рибофлавина в процентах (открываемость) проводят по формуле:

(1) ,

где: Ах – оптическая плотность исследуемого раствора;

Ао – оптическая плотность раствора СО рибофлавина;

ах – масса навеска исследуемого образца рибофлавина;

0,00002 – содержание рибофлавина в г в 1 мл раствора СО.

ПРЕЦИЗИОННОСТЬ

Приготовить модельный раствор рибофлавина №2 (табл.2).

Готовят параллельно по три раствора.

Растворы А1, А2, А3. В три мерные колбы вместимостью 100 мл помещают по 3,0 мл раствора модельной смеси 2 и доводят водой до метки.

Растворы А4, А5, А6. В другие три мерные колбы вместимостью 100 мл помещают по 5,0 мл раствора модельной смеси 2 и доводят водой до метки.

Растворы А7, А8, А9. В следующие три мерные колбы вместимостью100 мл помещают по 7,0 мл раствора модельной смеси 2 и доводят водой до метки.

Измеряют оптическую плотность каждого из 9 приготовленных растворов на спектрофотометре при длине волны 445 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора СО рибофлавина.Расчет содержания рибофлавина в г/мл проводят по формуле:

(2) ,

где: Ах – оптическая плотность исследуемого раствора;

Ао – оптическая плотность раствора СО рибофлавина;

0,00002 – содержание рибофлавина в г в 1 мл раствора СО.

Va – объем аликвоты раствора модельной смеси 2, взятый для разведения, мл.

Результаты заносят в таблицу №___ и рассчитывают стандартное отклонение (SD) и относительное стандартное отклонение (RSD).



edu 2018 год. Все права принадлежат их авторам! Главная